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研究背景

人用和獸用藥物是一種新興的有機污染物，首次發(fā)現是在20世紀70年代的時(shí)候，在污水流出物中檢測出。藥物的生產(chǎn)和發(fā)展旨在治愈疾病、改善人類(lèi)健康，但由于過(guò)量或過(guò)期藥物的隨意排放，同時(shí)廢水處理廠(chǎng)（WWTPs）對大多數藥物殘留的去除較為低效，所以低濃度藥物及其分解產(chǎn)物仍然廣泛分布在水生系統中。

抗抑郁藥是全球治療焦慮、恐慌癥和抑郁癥最常用的藥物。它們也是水生環(huán)境中最常檢測到的藥物。已有研究表明，多種抗抑郁藥物在水生環(huán)境及水生生物中積累，抗抑郁藥物可能會(huì )影響水生生物的繁殖能力、生存、生長(cháng)、捕食和學(xué)習行為，但是抗抑郁藥物影響水生生物的作用機制仍然難以明確。

作者為了更好地了解不同種類(lèi)抗抑郁藥誘導的毒性反應在非靶向魚(yú)類(lèi)中的作用機制，用分屬于不同抗抑郁藥物類(lèi)別的阿米替林（Amitriptyline hydrochloride）、氟西?。‵luoxetine hydrochloride）和鹽酸米安色林（mianserin hydrochloride）對早期發(fā)育階段的斑馬魚(yú)胚胎進(jìn)行處理，然后進(jìn)行了轉錄組測序（RNA-Seq），基于前面轉錄組的分析結果，作者采取兩組qPCR驗證實(shí)驗：

1.?DEG表達模式驗證

作者根據RNA- seq結果選取了15個(gè)基因（4個(gè)上調、11個(gè)下調），用qPCR驗證其表達模式。結果表明，qPCR結果與RNA-Seq結果相似（圖3A~C）。此外，通過(guò)線(xiàn)性擬合和皮爾遜相關(guān)性方法分析了RNA-Seq和qPCR的結果間的相關(guān)性，結果表明兩種方法的分析結果呈顯著(zhù)正相關(guān)（圖3D~F）。

2.不同濃度的抗抑郁藥物處理下DEG的應答反應

作者用三種不同濃度的抗抑郁藥（0.1、1和10 μg /L）處理斑馬魚(yú)胚胎，應用qPCR試驗確定6個(gè)選定的基因的濃度—應答關(guān)系。結果表明，ptgdsb的mRNA水平只在1 μg /L阿米替林和10 μg /L米安色林處理組顯著(zhù)降低；而dusp5表達水平在10 μg /L阿米替林和米安色林處理組以及所有氟西汀處理組中均顯著(zhù)降低；除了在1和10 μg /L阿米替林處理組中的nr1d1表達水平未受抑制之外，nr1d1和per2在幾乎所有抗抑郁藥物處理組均受到顯著(zhù)抑制。此外，兩個(gè)與早期生長(cháng)應答相關(guān)的基因egr1和egr4在0.1和10 μg /L阿米替林處理組和所有米安色林處理組中表達下調，egr4在所有氟西汀處理組降低，而egr1只在0.1和10 μg /L氟西汀處理組中表達降低（圖4）。

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